Методы диагностики Helicobacter pylori

Бактерии Helicobacter pylori повреждают поверхностный эпителий желудка и вызывают воспаление. Чаще всего обнаруживаются у пациентов с язвенной болезнью желудка (в 60-80 % случаев) и двенадцатиперстной кишки (90-100 % случаев).В настоящее время диагностика хеликобактериоза не представляет трудностей.

Чтобы выявить инфицирование бактериями, нужно сдать анализ крови из вены или пробы выдыхаемого воздуха (аэротест). В период обострения заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки назначается гастроскопия (ФГДС), при проведении которой врач-эндоскопист может взять участок слизистой (биоптат) для экспресс-теста или морфологического исследования на наличие Helicobacter pylori.

Методы диагностики

Анализ крови на антитела к Helicobacter pylori

Преимущества

доступен всем пациентам;
не сопровождается выраженным дискомфортом и стрессом при проведении процедуры (инъекционный метод забора крови);
прием лекарственных препаратов, применяемых для лечения заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки, не оказывает влияние на результат исследования.

Подготовка

Процедура забора крови проводится утром натощак.

За сутки до исследования из рациона исключается жирная пища.
Курение прекращают за 8 часов до анализа.

Проведение процедуры

Забор крови производится путем венепункции. Материал отбирают в стерильную вакуумную пробирку с активатором свертывания для быстрого отделения сыворотки. Кровь доставляется в лабораторию в течение 2 часов. Микропробирки с сывороткой разрешается хранить в холодильнике при температуре 2-8 °С или в морозильной камере при -20 °С до 10 суток.

Особенности метода

Для выявления бактерий применяется иммуноферментный анализ – ИФА. Это лабораторный метод предполагает исследование сыворотки крови. Путем химических реакций врачи определяют наличие в ней антител – специфических белков иммунологической природы, выделяющихся при воздействии на организм человека различных антигенов, не знакомых ему (чужеродных бактерий, вирусов, грибов, токсинов, аллергенов и т. д.). Helicobacter pylori является инфекционным возбудителем гастропатологии. При попадании в желудочно-кишечный тракт он активирует систему иммунитета и вызывает выработку антител – иммуноглобулинов (Ig). ИФА помогает диагностировать наличие или отсутствие данной инфекции.

Бывают ситуации, когда обнаруженные антитела в сыворотке крови является ложноположительным результатом. Это может быть связано с длительным циркулированием в плазме иммуноглобулинов после уничтожения бактерий вследствие эрадикационной терапии. Антитела присутствуют в крови в течение месяца после лечения, а у некоторых остаются пожизненно. В другом случае все наоборот. Инфицирование есть, а антитела в сыворотке крови не определяются (ложноотрицательный результат). Это может быть связано с ранним периодом после заражения. Антитела не успевают выработаться из-за слабого иммунного ответа. Чтобы избежать неточностей в результатах, необходимо дополнительно исследовать фракции иммуноглобулинов 3 видов: M, G, A.

Характеристики специфических белков крови:

IgM – определяется сразу после заражения, до выявления IgG.
IgG – вырабатывается через 3-4 недели после попадания в организм инфекционного «агента». Концентрация данного класса иммуноглобулинов напрямую зависит от начала эрадикационной терапии. Ложноположительный результат на антитела к Helicobacter pylori сохраняется в течение месяца после полного уничтожения возбудителя.
IgA – секреторный иммуноглобулин. Может определяться в крови, слюне и желудочном соке. Свидетельствует о степени выраженности воспалительного процесса. Появляется в крови через 2-3 недели от момента заражения, может циркулировать в течение нескольких лет.

Расшифровка анализа

Существует качественное и количественное определение антител к Helicobacter pylori. В первом случае диагностируют наличие специфических иммуноглобулинов, а во втором их концентрацию. При качественном анализе определяются суммарные антитела (IgM, IgG, IgA). При количественном исследовании используют нормы содержания специфических белков в крови.

У каждой лаборатории свои референсные значения, применяемые для определенного вида реактивов.

Вид исследования	Норма	Патология
Качественный анализ на антитела к Helicobacter pylori	Отрицательный (отсутствие антител)	Положительный (наличие антител)
Количественный анализ на антитела к Helicobacter pylori:	Нормальные референсные значения	Превышение показателей
IgM	Отрицательный (значения IgM в пределах нормы) При нормальных показателях IgG и IgA инфицирования нет	Положительный (референсные значения превышают норму) Определяется сразу после заражения хеликобактериозом (выявляется в течение 3-4 недель от контакта с возбудителем)
IgG	Отрицательный IgG может быть ложноотрицательным в течение 3-4 недель после заражения (IgM положительный)	Положительный Инфицирование Helicobacter pylori Может превышать норму в течение месяца после эрадикационной терапии
IgA	Отрицательный Может быть ложноотрицательным в ранний период после контакта с возбудителем (в течение 2-3 недель от момента заражения)	Положительный Чем выше концентрация IgA в сыворотке крови, тем активнее протекает воспалительный процесс

Возможны сомнительные результаты исследования. В таких случаях анализ на антитела к Helicobacter pylori повторяют через 2-3 недели.

Дыхательный уреазный тест на Helicobacter pylori

Преимущества

помогает выявить даже низкие концентрации возбудителя;
безопасный метод, не сопровождается радиоактивной нагрузкой на пациента (при использовании тестовых растворов мочевины, меченой нерадиоактивными изотопами);
оценивается процент бактерий на всей поверхности слизистой желудка;
удобен для пациентов (неинвазивный метод);
дыхательный уреазный тест с раствором карбамида разрешен беременным и младенцам;
является точным диагностическим исследованием.

Подготовка

Дыхательный уреазный тест проводится натощак. Перед исследованием с утра можно почистить зубы без применения ополаскивателей и освежителей для полости рта. Не рекомендуется использовать жевательные резинки.
Накануне забора проб разрешен легкий ужин. С 22 часов вечера и до начала процедуры есть нельзя, питье отменяют за час до исследования.
За 2-3 дня до аэротеста запрещен прием алкоголя (пары алкоголя искажают результаты проб). Также на этот период исключаются продукты, вызывающие метеоризм (капуста, бобовые, чеснок, яблоки, грибы, черный хлеб и другие).
Курение прекращают за 8 часов до начала процедуры.
За 2 недели до исследования отменяют препараты висмута («Де-нол», «Викалин», «Викаир»), ингибиторы протонной помпы («Омез», «Нольпаза», «Нексиум» и другие). Данные средства угнетают активность уреазы.
За неделю до проведения теста прекращают прием нестероидных противовоспалительных и антибактериальных препаратов.
За 2 дня до процедуры исключаются лекарственные средства из группы блокаторов Н₂ – гистаминовых рецепторов («Гистодил», «Примамет», «Ранитидин», «Фамотидин» и другие).
Разрешены препараты, снижающие избыточную продукцию соляной кислоты желудком (антациды – «Алмагель», «Фосфалюгель», «Маалокс», «Гевискон» и т. д.).

Специфичность метода

Дыхательный уреазный тест на Helicobacter pylori связан с особенностями жизнедеятельности бактерии. Возбудитель в процессе своего существования выделяет защитный фермент – уреазу. Это биологически активное соединение помогает микроорганизму справляться с агрессивным воздействием соляной кислоты, выделяемой в составе желудочного сока. В процессе пищеварения уреаза расщепляет продукт метаболизма белков – мочевину. В результате образуется аммиак и углекислота. Эта химическая реакция стала основой для аэротеста. При дыхании пациента можно измерить концентрацию углекислого газа в выдыхаемом воздухе.

Разновидности дыхательного уреазного теста на Helicobacter pylori:

Аэротест с применением тестового раствора или драже мочевины, меченой радиоактивным углеродом (¹⁴С). Данный метод применяется редко из-за лучевой нагрузки на организм человека.

Проведение процедуры:

Пациент дышит через специальную трубку, находящуюся глубоко в ротовой полости. Дыхание должно быть ровным и спокойным. Трубка подсоединяется к специальному газовому спектрометру, замеряющему процент меченого углекислого газа в выдыхаемом воздухе. В начале процедуры берут 2 фоновые пробы аэротеста. Затем пациенту дают выпить тестовый раствор или проглотить специальное драже с мочевиной, меченой радиоактивным изотопом. Через каждые 15 минут (в течение часа) осуществляют забор дополнительных 4 проб выдыхаемого воздуха. Не допустимо попадание слюны в трубку, результат исследования может стать недостоверным. В этом случае пробу придется повторить через 40-60 минут после предыдущей. Чтобы избежать неприятной ситуации, трубку во время процедуры необходимо периодически вынимать, а слюну сглатывать.

Дыхательный уреазный тест с применением стабильного раствора мочевины, меченой нерадиоактивным углеродом (¹³С). Данный метод является «золотым стандартом» в диагностике хеликобактериоза (подробнее о методе см. здесь).

Проведение процедуры:

Во время исследования осуществляют забор 2 проб выдыхаемого воздуха. Процедура проводится на голодный желудок, в положении сидя. Пациент делает глубокий вдох и на несколько секунд задерживает дыхание. Затем выдыхает в герметичный одноразовый пакет, который сразу же плотно закрывают. Пациенту дают выпить тестовый раствор мочевины, меченой нерадиоактивным изотопом. Через полчаса осуществляют повторный забор выдыхаемого воздуха. С помощью масс-спектрометра измеряют концентрацию углекислоты в выдыхаемом воздухе. Полученные результаты сравнивают и делают выводы о наличии инфицирования.

Аэротест с применением раствора мочевины (карбамида). Данная методика не является максимально точной. Рекомендуется для диагностики хеликобактериоза у беременных женщин и маленьких детей.

Проведение процедуры:

Методика схожа с предыдущим тестом. У пациента делают забор 2 проб выдыхаемого воздуха. Измеряют концентрацию углекислого газа до и после применения тестового раствора карбамида.

Расшифровка результатов аэротеста на Helicobacter pylori

Вид исследования

Норма

Патология

Качественное определение уреазной активности Helicobacter pylori

Отрицательный аэротест

Инфицирования нет или полное излечение после эрадикационной терапии

Положительный аэротест

Инфицирование Helicobacter pylori

Количественное определение уреазной активности Helicobacter pylori (по процентному содержанию изотопа в выдыхаемом воздухе)

Менее 1%

Хеликобактериоза нет

1-3,4% – легкое инфицирование Helicobacter pylori
3,5-6,4% – среднетяжелый воспалительный процесс
6,5-9,4% – тяжелое инфицирование
Более 9,5% – крайне тяжелая степень хеликобактериоза

Уреазный экспресс-тест на Helicobacter pylori

Во время проведения гастроскопии (ФГДС) врач-эндоскопист берет кусочек слизистой из любого отдела желудка. Биоптат помещают на реагентную тест-полоску, обработанную раствором мочевины. Под действием фермента уреазы, выделяемой бактериями Helicobacter pylori, происходит ощелачивание среды. Мочевина расщепляется. Вследствие этого индикаторная полоска меняет свою окраску – с желтой на малиновую. Тест считается положительным. От скорости изменения цвета реагента зависит выраженность воспалительного процесса и концентрация возбудителя в биоптате.

Оценка полученного результата:

Helicobacter pylori (+) – слабое инфицирование (реагентная тест-полоска изменила свой цвет в течение суток).
Helicobacter pylori (++) – умеренный инфекционный процесс (реагентная тест-полоска изменила свой цвет в течение 2-3 часов).
Helicobacter pylori (+++) – тяжелое инфицирование (реагентная тест-полоска изменила свой цвет в течение одного часа).

Биопсия с исследованием материала

Преимущества

наиболее точный метод диагностики Helicobacter pylori (специфичность до 100%);
исключает возможность ложноположительных результатов, подтверждает наличие инфекции.

Подготовка

Процедура ФГДС предусматривает 3-х дневную диету с исключением продуктов, раздражающих пищеварительный тракт (нельзя жареные, копченые, соленые, жирные и острые блюда).
Запрещаются газированные напитки, кофе, алкоголь.
Диета бесшлаковая на основе легкоусвояемого меню (каши на воде, отварное мясо, йогурты, овощные салаты и т. д.). Последний прием пищи за 12 часов до проведения ФГДС.
За 3 часа до начала исследования необходимо отказаться от сигарет.
Нельзя принимать лекарства перед эндоскопической процедурой.
Прием жидкости прекращают за 1-2 часа до начала исследования.
Не разрешается перед процедурой чистить зубы, применять ополаскиватели или освежители для полости рта, а также жевательные резинки.
Гастроскопия проводится на голодный желудок.

Проведение процедуры

ФГДС сопровождается введением специального зонда в желудок. Процедура неприятна из-за диспепсических проявлений. Во время проглатывания зонда происходит раздражение рецепторов ротоглотки, и пациент испытывает чувство тошноты и рвотные позывы. Длительность процедуры обычно не превышает 10-15 минут. За это время специалист осматривает слизистую желудка и двенадцатиперстной кишки, выявляет очаги воспаления (эрозии, язвы, дефекты и т. д.) и проводит забор материала для последующего морфологического исследования.

Для бактериологического посева биоптата на питательную среду потребуется не менее 5 образцов тканей. Их помещают в стерильные пробирки с транспортным раствором. Затем доставляют в бактериологическую лабораторию. Helicobacter pylori выращивают на питательных средах в течение 3-6 дней, иногда дольше (до 12 суток).

Гистологическое исследование мазков-отпечатков, полученных из биоптатов слизистой желудка, является «золотым стандартом» среди инвазивных методов диагностики хеликобактериоза. Участки тканей при ФГДС берут с неповрежденного эпителия (исключают эрозивно-язвенные дефекты). Helicobacter pylori живет на здоровой слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки. Затем полученные мазки-отпечатки окрашивают (по Романовскому-Гимзе, по Граму или другими красителями). Производят микроскопию. Бактерии обнаруживаются в желудочной слизи, располагаются свободно. Helicobacter pylori имеет характерные для него изогнутые формы: спиралевидную, в виде буквы «S» или распахнутых крыльев птицы.

Оценка результатов биопсии

Вид исследования	Норма	Патология
Бактериологический посев биоптата на Helicobacter pylori	Отрицательный (рост бактерий не обнаружен)	Положительный (на питательной среде выросли культуры Helicobacter pylori)
Гистологическое исследование биоптата на Helicobacter pylori (качественный анализ)	Отрицательный (бактерии в мазке отсутствуют)	Положительный (обнаружена одна или большее количество бактерий при микроскопии)
Гистологическое исследование биоптата на Helicobacter pylori (количественный анализ)	Отрицательный (0 бактерий в мазке, инфицирования нет)	3 степени распространения возбудителя (микроскопия на увеличении в 360 раз): Слабая обсемененность Helicobacter pylori (+) – в поле зрения не более 20 бактерий Умеренная обсемененность Helicobacter pylori (++) – в поле зрения от 20 до 50 микроорганизмов Высокая обсемененность Helicobacter pylori (+++) – в поле зрения более 50 микробных тел

Резюме

Таким образом, существует 2 точных диагностических метода выявления хеликобактериоза. Они являются «золотым стандартом» в современной гастроэнтерологии. Первый метод – неинвазивный: дыхательный уреазный тест с раствором мочевины, меченой нерадиоактивным углеродом; второй – инвазивный: ФГДС с биопсией и последующим гистологическим изучением образцов тканей.

Для подтверждения инфицирования Helicobacter pylori требуется не менее 2 различных исследований. Диагноз ставят на основании клинической симптоматики и результатов, полученных в процессе лабораторных и эндоскопических мероприятий.